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篇1

【關(guān)鍵詞】 細(xì)胞

【關(guān)鍵詞】 流式細(xì)胞術(shù)；網(wǎng)織紅細(xì)胞；顯微鏡

網(wǎng)織紅細(xì)胞是尚未完全成熟的紅細(xì)胞，其胞漿尚存有嗜堿性的 RNA 物質(zhì)。眾所周知，網(wǎng)織紅細(xì)胞目視計(jì)數(shù)誤差較大，其原因?yàn)椴僮魅藛T對網(wǎng)織紅細(xì)胞的認(rèn)識不同、血涂片的質(zhì)量等。流式細(xì)胞儀具有對細(xì)胞分析和分選的功用，是近年來熒光細(xì)胞分析技術(shù)的創(chuàng)舉，開創(chuàng)了生物細(xì)胞研究及臨床檢測應(yīng)用的新領(lǐng)域。流式細(xì)胞術(shù)具有高速度、高靈敏度、高精度、高純度、高細(xì)胞數(shù)量、高參數(shù)等特點(diǎn)。我們應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)和傳統(tǒng)的煌焦油蘭法對血中網(wǎng)織紅細(xì)胞進(jìn)行了對比分析，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 對象 正常人靜脈血 56 例，其血常規(guī)的各個(gè)參數(shù)均在正常范圍內(nèi)。

1.2 儀器及試劑 使用儀器為美國貝克曼公司生產(chǎn) FC-500 流式細(xì)胞儀，試劑由貝克曼公司提供，為進(jìn)口試劑。

1.3 方法 煌焦油蘭法［1］：按全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程操作。流式細(xì)胞術(shù)：取肝素抗凝血 50 μl，采用 0.01%的 Pyronin-Y 進(jìn)行染色 20 min，嚴(yán)格按 FG-500 的操作規(guī)程操作。

2 結(jié)果

2.1 56例血樣檢測均獲成功。流式計(jì)數(shù)法所得結(jié)果為1.60±1.12，涂片光鏡下計(jì)數(shù)所得結(jié)果為0.92±0.24。兩種方法的結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)直線相關(guān)分析（r=0.6086，n=56，P＜0.01）呈高度正相關(guān)，有顯著性差異。

2.2 對其中 6 例血中網(wǎng)織紅細(xì)胞用兩種方法進(jìn)行了 4 次重復(fù)性測定，流式細(xì)胞術(shù)所得結(jié)果均值的變異系數(shù)（CV=4.8%）顯著低于光鏡計(jì)數(shù)法（CV=12.2%），說明流式細(xì)胞術(shù)比光鏡計(jì)數(shù)法具有更好的重復(fù)性。

3 討論

流式細(xì)胞術(shù)是從 RNA 定量角度去計(jì)數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞，不僅可自動化計(jì)數(shù)，還可根據(jù) RNA 含量的不同去揭示網(wǎng)織紅細(xì)胞發(fā)育過程中動力學(xué)的變化，根據(jù)網(wǎng)織紅細(xì)胞 RNA 含量的分布直方圖，可直觀地了解血中各期網(wǎng)織紅細(xì)胞的分布狀態(tài)。流式細(xì)胞術(shù)比光鏡計(jì)數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞的均值偏高，這可能是一些Ⅳ期的網(wǎng)織紅細(xì)胞在光鏡下辨認(rèn)困難，而流式細(xì)胞術(shù)檢測具有極高的靈敏度，對于發(fā)出較弱光的Ⅳ期網(wǎng)織紅細(xì)胞也可以探測到熒光信號所致。流式細(xì)胞儀測定網(wǎng)織紅細(xì)胞 RNA 與計(jì)數(shù)，具有速度快、信息量大、統(tǒng)計(jì)學(xué)精度高、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，且網(wǎng)織紅細(xì)胞 RNA 含量的分析與網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)相結(jié)合更能反映骨髓造血機(jī)能狀態(tài)。因此，流式細(xì)胞術(shù)可作為評價(jià)骨髓造血功能的一種新方法，為臨床貧血疾病的診斷和療效的觀察提供更加可靠的信息，具有更為重要的價(jià)值。

篇2

【關(guān)鍵詞】網(wǎng)織紅細(xì)胞 血細(xì)胞分析儀 煌焦油藍(lán)手工法 對比分析

中圖分類號：R446.11 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B 文章編號：1005-0515（2011）3-314-02

網(wǎng)織紅細(xì)胞是介于晚幼紅細(xì)胞和成熟紅細(xì)胞之間的過渡階段細(xì)胞，在周圍血液中的數(shù)值可反映骨髓造血功能，因而對各類貧血的診斷和治療反應(yīng)的觀察均有其重要意義。[1]目前大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室采用的是煌焦油藍(lán)活體染色法計(jì)數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞，但是在臨床應(yīng)用中有諸多不便，費(fèi)時(shí)而且操作比較煩瑣，且受人為因素影響較多，重復(fù)性較差?，F(xiàn)在COULTER LH750五分類血細(xì)胞分析儀計(jì)數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞與傳統(tǒng)的煌焦油藍(lán)手工法進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)儀器法操作方便，而且結(jié)果重復(fù)性好。

1 材料、試劑與方法

1.1 標(biāo)本來源

本院隨機(jī)病人（包括住院和門診病人）

1.2 試劑

1.2.1 煌焦油藍(lán)鹽水溶液

取煌焦油藍(lán)4克，溶于109mmol/l枸櫞酸鈉20ml中，最后用8.5g/l氯化鈉溶液加至1000ml，混勻，過濾后貯存在棕色試劑瓶中備用。

1.2.2 全自動血液分析儀試劑

全自動血液分析儀試劑為儀器的配套產(chǎn)品，由相應(yīng)廠家提供。

1.3 儀器法

用一次性采血器采集患者靜脈血2 ml于EDTA-K2抗凝管中，混勻。使用COULTER HMX hematology五分類全自動血液分析儀多次檢測同一標(biāo)本，檢測試劑與質(zhì)控品為儀器配套產(chǎn)品，按照操作規(guī)程正確操作。

1.4 手工法

1.4.1 將煌焦油藍(lán)鹽水溶液2滴加入小試管中，取同一分標(biāo)本末梢血2滴，混勻染色30分鐘。

1.4.2 取出混合血液推成血片，然后在油鏡下計(jì)數(shù)1 000個(gè)紅細(xì)胞中網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)。

2 結(jié)果

取網(wǎng)織紅細(xì)胞標(biāo)本各10份，每份標(biāo)本各做10次，結(jié)果發(fā)現(xiàn)儀器法測定的平均CV為3.37%、而手工法測定的CV為22.31%，結(jié)果顯示儀器法所做結(jié)果的重復(fù)性和精確度較好，而手工法變異系數(shù)大，重復(fù)性和精確度都比較差，受人為影響因素較多。

3 討論

網(wǎng)織紅細(xì)胞是晚幼紅細(xì)胞到成熟紅細(xì)胞之間未完全成熟的紅細(xì)胞，因其胞漿內(nèi)尚存在多少不等的嗜堿性物質(zhì)核糖核酸，在活體染色時(shí)，被煌焦油藍(lán)染色后，嗜堿物質(zhì)凝集成顆粒，其顆粒又可連綴成線，而構(gòu)成網(wǎng)織狀而得名[2]。用煌焦油藍(lán)計(jì)數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞時(shí)，其重復(fù)性較差[3]，費(fèi)時(shí)，準(zhǔn)確性也容易受到計(jì)數(shù)細(xì)胞少，血涂片的厚薄、細(xì)胞是否均勻分布、核糖核酸染色效果好壞及染色溫度、染色時(shí)間長短等因素[4]的影響。而DIFF儀器法測定網(wǎng)織紅細(xì)胞時(shí)，用血量少，而且計(jì)數(shù)細(xì)胞多，所以結(jié)果準(zhǔn)確性高，重復(fù)性好。儀器法操作簡便快速，減少諸多人為誤差因素影響，為臨床提供更加可靠的結(jié)果。

雖然手工法測定網(wǎng)織紅細(xì)胞可以直觀細(xì)胞形態(tài)而且無需昂貴的儀器，但其重復(fù)性較差，有其使用的局限性；而儀器法操作方便，結(jié)果準(zhǔn)確性高，重復(fù)性好，避免主觀因素的干擾，方法易于標(biāo)準(zhǔn)化，適合臨床大批量標(biāo)本的快速檢測。

參考文獻(xiàn)

[1]熊立凡 劉成玉，臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2010，34.

[2]叢玉隆.當(dāng)代血液分析技術(shù)與臨床[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1997,184.

篇3

【關(guān)鍵詞】 巨噬細(xì)胞；瘀血；泰山散瘀膏

急性軟組織損傷是臨床常見的外傷，外來暴力、扭傷等均產(chǎn)生不同程度的損傷，嚴(yán)重者可影響工作和生活。其處理方法較多，局部外用藥可以幫助緩解癥狀，促進(jìn)損傷恢復(fù)。泰山散瘀膏是山東省泰安市中醫(yī)醫(yī)院制劑，在臨床應(yīng)用20余年，療效顯著。筆者通過實(shí)驗(yàn)對泰山散瘀膏的活血祛瘀作用機(jī)制進(jìn)行初步研究，現(xiàn)將研究結(jié)果總結(jié)報(bào)告如下。

1 材料與儀器

1.1 實(shí)驗(yàn)動物 成年SPF級小鼠，體重（25±5） g，雌雄不限，購自山東省泰邦生物制品有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器 MIUI-Q超純水系統(tǒng)，購自法國MilliPore公司；JGL-16G型離心機(jī)，購自上海安亭科學(xué)儀器廠。

1.3 藥物與試劑 泰山散瘀膏主要由大黃、木香、川牛膝、玄參、羌活、當(dāng)歸、赤芍、三棱、莪術(shù)、延胡、南星、紫草、桃仁、枳實(shí)、青皮、花椒、降香、松節(jié)、透骨草、伸筋草、荊芥、薄荷、紫花地丁、制川烏、蘇木、水蛭、烏梢蛇、制草烏、海桐皮、木瓜、土鱉蟲、地龍、三七、紅花等藥物組成，由泰安市中醫(yī)醫(yī)院制劑科制；凡士林、吉姆薩染劑等為國產(chǎn)分析純，購自天津市永大化學(xué)試劑有限公司。

2 方 法

2.1 實(shí)驗(yàn)方法 將泰山散瘀膏均勻涂到透氣薄膜上，剪成1 cm2大小的片狀，4 ℃冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩Ｈ?2只小鼠，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對照組，每組16只。取實(shí)驗(yàn)組小鼠，將小鼠腹部去毛并局部貼覆涂有泰山散瘀膏的透氣薄膜1 cm2，四角縫在小鼠腹部，每天換藥1次，連續(xù)3天。以透氣薄膜在小鼠腹部停留2 h以上為用藥時(shí)間合格，停留時(shí)間不足2 h者重新?lián)Q藥。末次給藥后30 min，腹腔注射濃度1 %的抗凝雞血0.3 ml，分別于注射雞血后6 h、12 h各處死8只小鼠抽取腹腔液，作涂片，瑞氏-吉姆薩染色，鏡下觀察，計(jì)數(shù)紅細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及巨噬紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞數(shù)量。對照組除透氣膜上涂凡士林外，其余操作與實(shí)驗(yàn)組相同，所得數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

2.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)分析軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量數(shù)據(jù)以表示，兩組間比較用t檢驗(yàn)。P

3 結(jié) 果

注射雞血6 h后觀察結(jié)果。油鏡下觀察腹腔液涂片，可見對照組與實(shí)驗(yàn)組片中均有大量紅細(xì)胞及巨噬細(xì)胞，多數(shù)紅細(xì)胞呈游離狀態(tài)，部分巨噬細(xì)胞呈球形，胞質(zhì)內(nèi)未見吞噬的紅細(xì)胞，亦可見大量吞噬紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞，其中實(shí)驗(yàn)組吞噬紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞數(shù)量明顯多于對照組。用測微尺計(jì)數(shù)1 mm2內(nèi)的游離紅細(xì)胞、未吞噬紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞及吞噬紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞數(shù)，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)組吞噬紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞明顯多于對照組，差異有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

注射雞血12 h后觀察結(jié)果油鏡下觀察腹腔液涂片，可見實(shí)驗(yàn)組與對照組中游離紅細(xì)胞基本消失，被巨噬細(xì)胞吞噬的紅細(xì)胞比例明顯增多。計(jì)數(shù)1 mm2內(nèi)的游離紅細(xì)胞、未吞噬紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞及吞噬紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞數(shù)，實(shí)驗(yàn)組未吞噬紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞及吞噬紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞數(shù)明顯多于對照組，差異有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

4 討 論

急性軟組織損傷屬于中醫(yī)學(xué)“傷筋”范疇，是局部氣血經(jīng)絡(luò)損傷后的病理反應(yīng)。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，急性軟組織損傷的原因主要有兩方面：一方面是外力直接造成局部組織細(xì)胞微觀結(jié)構(gòu)損傷和微小血管破裂、出血，以及組織細(xì)胞充血水腫和變性壞死致受損局部腫脹、疼痛；另一方面是損傷后局部組織細(xì)胞釋放出炎性介質(zhì)、代謝產(chǎn)物聚集造成內(nèi)環(huán)境改變，引起損傷細(xì)胞代謝障礙，從而加重局部癥狀和體征以及病理變化[1]。

祖國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為急性“傷筋”后，脈絡(luò)破損，血離經(jīng)脈而成瘀，瘀血不散，氣血流行不通，不通則痛，氣滯血瘀，筋脈阻滯是筋傷的病機(jī)，活血化瘀為治療該病的大法[2]。

現(xiàn)代科學(xué)實(shí)驗(yàn)也證實(shí)了活血化瘀、消腫止痛中藥起兩方面的作用：①對損傷早期出現(xiàn)腫脹疼痛，活血化瘀藥可以控制和減緩炎癥反應(yīng)吸收由炎癥反應(yīng)所致的滲出、充血及水腫，修復(fù)由損傷所致的軟組織及血管壁，降低致痛物質(zhì)的濃度，減輕對游離神經(jīng)末梢的刺激，同時(shí)提高痛閾值起到消腫止痛作用。②對于損傷中晚期出現(xiàn)腫脹疼痛，活血化瘀藥可以使毛細(xì)血管擴(kuò)張，減輕毛細(xì)血管靜脈段的壓力，使白細(xì)胞與其它有形成分的滲出減少，降低損傷部位壞死發(fā)生率[3]。

本膏藥通過透皮吸收作用于創(chuàng)傷局部，從而維持局部相對穩(wěn)定的血藥濃度，起到散瘀、消腫和止痛的功效[4]。方中君藥大黃、三七、紅花、乳香、沒藥等活血化瘀，消腫止痛；臣藥土鱉蟲、三棱、莪術(shù)、澤蘭破血逐瘀，當(dāng)歸補(bǔ)血活血、活血祛瘀、涼血消腫；佐藥木香、玄參、烏蛸蛇、伸筋草、荊芥、紫花地丁、蒲公英等涼血瀉火，活血祛瘀，使藥冰片、薄荷、兒茶等引經(jīng)通絡(luò)止痛；以上諸藥配伍使用，具有活血化瘀、消腫止痛、涼血止血的作用。藥理學(xué)研究方中大黃可降低毛細(xì)血管通透性，減少滲出，同時(shí)能擴(kuò)張毛細(xì)血管，改善微循環(huán)灌注，解除損傷后微循環(huán)的障礙[5]；乳香提取物以及木瓜提取液能明顯降低小鼠腹腔巨噬細(xì)胞及中性白細(xì)胞的吞噬功能。土元能明顯降低血脂及促進(jìn)脂肪代謝[6]。乳香、蒲公英、沒藥、土元均能增加紅細(xì)胞變形能力，降低血小板黏性和纖維蛋白原含量，從而降低血液黏度，改善微循環(huán)，促進(jìn)瘀血的吸收及轉(zhuǎn)運(yùn)，為機(jī)體組織的修復(fù)創(chuàng)造有利條件[7，8]。

本實(shí)驗(yàn)通過小鼠腹腔注射抗凝雞血構(gòu)建淤血模型，觀察并比較巨噬細(xì)胞及吞噬紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞的數(shù)量。巨噬細(xì)胞廣泛分布于機(jī)體各臟器和組織，是一類可塑性強(qiáng)、功能狀態(tài)呈高異質(zhì)性的細(xì)胞群體，在不同的免疫微環(huán)境影響下，表現(xiàn)出明顯的功能的差別。在正常組織中的巨噬細(xì)胞處于靜息或未活化狀態(tài)，但是外界的免疫炎癥刺激可誘導(dǎo)其活化。結(jié)果表明，泰山散瘀膏可通過增加巨噬細(xì)胞的數(shù)量和促進(jìn)其活化，吞噬紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞明顯多于對照組，使巨噬細(xì)胞清除腹腔內(nèi)紅細(xì)胞的能力增強(qiáng)、速度加快，從而起到活血化瘀的作用。

4 參考文獻(xiàn)

[1] 李衛(wèi)星，譚大琦，李秋生，等.散瘀止痛膏對大鼠急性軟組織損傷的治療作用[J].中醫(yī)正骨，2000，12（11）：11-12.

[2] 王志華，王慧生，高紀(jì)和.消腫止痛液的藥理實(shí)驗(yàn)研究[J].中草藥，1998，29（1）：31.

[3] 黃俊卿，薛繼強(qiáng).中藥熏蒸療法治療軟組織損傷疼痛的機(jī)理探討[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，8（5）：22-23.

[4] 程春生，張?jiān)?，李春游，?中藥熏洗法治療急性軟組織損傷的實(shí)驗(yàn)研究[J].中醫(yī)正骨，2005，17（11）：12-13.

[5] 陰健.中藥的現(xiàn)代藥理研究[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1993：9.

[6] 李淑娟，董曉華，武海霞，等.大黃及其有效成分藥理作用研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述，2005，11（1）：76-78.

篇4

【關(guān)鍵詞】 血尿；流式尿沉渣分析儀；定位診斷

血尿是一種常見的臨床癥狀， 而對血尿中紅細(xì)胞來源的鑒別， 又是臨床診斷腎小球疾病與非腎小球疾病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。1979年Birch和Fairley[1]首先用相差顯微鏡觀察尿紅細(xì)胞形態(tài)的變化鑒別血尿來源以來，對尿中紅細(xì)胞來源進(jìn)行鑒別的方法報(bào)道也日益增多。1986年Shichiri等[2]報(bào)告用血液分析儀測量尿紅細(xì)胞體積來鑒別血尿來源，認(rèn)為較顯微鏡法準(zhǔn)確。1995年Hyodo[3]使用全自動尿沉渣分析儀來鑒別血尿部位，認(rèn)為此法具有簡單、快速，且不受主觀因素影響。國內(nèi)外不少學(xué)者對識別尿液中各種有形成分進(jìn)行了廣泛研究，但對激光參數(shù)在鑒別血尿來源的研究較少。作者用UF-100尿沉渣分析儀測定尿紅細(xì)胞平均前向散射光強(qiáng)度（RBC-MFsc）， 尿紅細(xì)胞前向散射光分布寬度（RBC-Fsc-DW）， 尿70%紅細(xì)胞前向散射光強(qiáng)度（RBC-P70Fsc）， 結(jié)合尿紅細(xì)胞提示信息， 綜合分析判斷血尿來源， 現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 收集自2012年1月～2013年4月本院住院患者尿標(biāo)本， 其中血尿標(biāo)本191份，腎臟病理活檢確診腎小球性血尿133例， 非腎小球性血尿58例。

1. 2 儀器和試劑 UF-100尿沉渣分析儀（日本Sysmex公司）及配套試劑、質(zhì)控品。光學(xué)顯微鏡（OLYMPUS CX-21）。

1. 3 實(shí)驗(yàn)方法 用一次性尿杯收集腎小球疾病患者和非腎小球疾病患者的清潔中段晨尿，充分混勻后倒于10 ml專用離心管中， 一管在UF-100上測定其紅細(xì)胞參數(shù)（開機(jī)前先用質(zhì)控品對儀器進(jìn)行校準(zhǔn)）。尿沉渣分析儀RBC-info分析按新版標(biāo)準(zhǔn)：RBC-P70Fsc >100ch且RBC-Fsc-DW

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件， 計(jì)量資料以（ x-±s）表示， 均數(shù)比較用t檢驗(yàn)， 計(jì)數(shù)資料結(jié)果比較用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2. 1 腎性血尿與非腎性血尿患者尿紅細(xì)胞各項(xiàng)激光參數(shù)見表1。

2. 2 UF-100紅細(xì)胞提示信息與普通顯微鏡檢驗(yàn)比較見表2， 根據(jù)紅細(xì)胞的提示信息， UF-100診斷腎性血尿的敏感性為83.5， 略低于普通光鏡的87.2， 特異性為94.8， 高于普通光鏡的92.1， 經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)無明顯差別（P0.05）。

3 討論

血尿是泌尿系統(tǒng)疾病常見的臨床癥狀。引起尿液紅細(xì)胞形態(tài)改變的主要原因有紅細(xì)胞通過腎小球?yàn)V膜時(shí)受到擠壓損傷及紅細(xì)胞在腎小管中不同的pH、滲透壓、尿酶、尿素等化學(xué)因素的影響， 使受損的紅細(xì)胞發(fā)生形態(tài)改變甚至破裂。明確血尿的出血部位和性質(zhì)有助于疾病的診斷。

該儀器采用流式和電阻抗原理， 通過一定染液染色檢測尿液標(biāo)本單個(gè)細(xì)胞的熒光強(qiáng)度和前向散射光強(qiáng)度及電阻大小來確定細(xì)胞類型和形態(tài)。國內(nèi)外已有大量關(guān)于UF-100識別尿中各種成分的研究報(bào)道。本文通過對UF-100測定紅細(xì)胞參數(shù)的研究， 發(fā)現(xiàn)腎性血尿組的RBC-MFsc、RBC-P70MFsc均值分別為58.5和66.7， 明顯低于非腎性血尿組的98.0和108.3， 與陳巧林報(bào)道[5]類似；RBC-Fsc-DW腎性血尿組為33.5， 略高于非腎性血尿組的32.6， 經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)無明顯差別， 與陳巧林報(bào)道不同， 這可能與所用的儀器、尿紅細(xì)胞判定標(biāo)準(zhǔn)及病例不同有關(guān)。紅細(xì)胞的提示信息是儀器根據(jù)紅細(xì)胞的各項(xiàng)參數(shù)而判定的， 根據(jù)紅細(xì)胞的提示信息， UF-100診斷腎性血尿的敏感性為83.5， 略低于普通光鏡的87.2， 特異性為94.8， 高于普通光鏡的92.1， 經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)無明顯差別， 表明UF-100尿沉渣分析儀可作為鑒別血尿來源的過篩試驗(yàn)， 另外， 由于UF-100尿沉渣分析儀標(biāo)本不需離心， 檢測準(zhǔn)確性、重復(fù)性良好， 不受主觀因素的影響， 在臨床值得推廣。

參考文獻(xiàn)

[1] Birch DF， Fairley KF， Haematuria：Glomeruir or non-glomeruiar？ Lancet， 1979，314（8147）： 845-846.

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篇5

關(guān)鍵詞：冠心?。环€(wěn)定型心絞痛；急性冠脈綜合癥；紅細(xì)胞膽固醇；基質(zhì)金屬蛋白酶一9

急性冠脈綜合癥（ acute coronary syndrome，ACS）是冠心病的急性過程，大多沒有先兆，難以預(yù)料。尋找預(yù)測ACS的簡便指標(biāo)意義重大。ACS患者紅細(xì)胞膜總膽固醇含量（total cholesterol content of erythrocyte membrances，CEM）高于SAP患者和健康對照人群，即不同的冠心病臨床狀態(tài)其CEM明顯不同。紅細(xì)胞內(nèi)游離膽固醇在脂核增大導(dǎo)致斑塊進(jìn)展方面已有研究，但CEM水平與代表粥樣斑塊易損性的炎癥指標(biāo)MMP-9之間的關(guān)系國內(nèi)外報(bào)道較少。

1資料與方法

1.1一般資料 選擇冠心病59例：其中穩(wěn)定性心絞痛（SAP）28例，急性冠脈綜合征（ACS）31例，在31例ACS中，不穩(wěn)定性心絞痛（UAP） 13例，急性心肌梗塞（AMI）18例。30例健康體檢者做對照組。除外入院前2月內(nèi)服用他汀類藥物，未控制的高血壓，合并周圍血管病，腦卒中，肝腎功能不全，甲狀腺疾病，腫瘤，免疫性和感染性疾病，急診介入治療和AMI發(fā)病超過12h，血常規(guī)中紅細(xì)胞計(jì)數(shù)異常者等。

1.2方法 E-ch：采用全血酶法測定。計(jì)算：全血TC（ mmol/L）=（Au-Ab）/（As-Ab）×5.46。E-ch（ mmol/L）=（全血TC-血漿TC）/壓積+血漿TC。MMP-9：采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理定量測定。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)資料采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)分布和方差齊性檢驗(yàn)；非正態(tài)分布數(shù)據(jù)經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換后接近正態(tài)分布再行檢驗(yàn)。計(jì)量資料采用均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間差異顯著性檢驗(yàn)采用Bonferroni法，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。相關(guān)性分析采用直線相關(guān)分析。P

2結(jié)果

2.1基本臨床資料 三組患者年齡、性別、傳統(tǒng)危險(xiǎn)因素等基礎(chǔ)資料和紅細(xì)胞參數(shù)、血脂比較：各組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，具可比性。

2.2 E-ch和血清MMP-9水平比較 見表2。

3.1紅細(xì)胞膽固醇與ACS的關(guān)系 2003年Kolodgie等在猝死于冠脈疾患者群中發(fā)現(xiàn)動脈斑塊的壞死脂核中含有紅細(xì)胞膜，且抗血型糖蛋白A免疫染色的程度與壞死脂核的大小密切相關(guān)；同時(shí)發(fā)現(xiàn)：大量紅細(xì)胞膜膽同醇的聚集可以導(dǎo)致脂質(zhì)核心的迅速增大，引起斑塊進(jìn)展和破裂。說明紅細(xì)胞豐富的游離膽固醇是斑塊脂質(zhì)的來源，紅細(xì)胞膽固醇參與了粥樣斑塊脂核的快速增大和進(jìn)展。Tziakas等的前瞻性研究表明：ACS患者CEM顯著高于慢性SAP和健康人群，并且在慢性SAP和健康人群間無差異，進(jìn)一步支持CEM增加是冠心病活動的標(biāo)志物，而不是存存冠狀動脈硬化與否的標(biāo)志。本研究指標(biāo)E-ch在實(shí)驗(yàn)中顯示出相似的統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果，揭示了E-ch與不穩(wěn)定性冠心病相關(guān)，E-ch水平增高是粥樣斑塊易損性增加和斑塊破裂的促進(jìn)因素，提示E-ch可能是冠心病活動的生化標(biāo)志。

3.2紅細(xì)胞膽固醇促使斑塊不穩(wěn)定的可能機(jī)制 影響斑塊迅速增大的因素是出血和炎癥。Kolodgie及2004年Moreno等指出：斑塊內(nèi)出血在進(jìn)展的動脈粥樣斑塊中很常見，新生血管和斑塊內(nèi)出血是導(dǎo)致斑塊易損、不穩(wěn)定的重要因素。2007年Kolodgie等又旨出，進(jìn)入斑塊內(nèi)的紅細(xì)胞主要來源于外膜血管中的滋養(yǎng)血管向內(nèi)膜層發(fā)展的幼稚易漏的新生血管網(wǎng)。斑塊內(nèi)急性炎癥是導(dǎo)致ACS發(fā)生的關(guān)鍵因素。 紅細(xì)胞進(jìn)入斑塊可能觸發(fā)及促進(jìn)斑塊內(nèi)炎癥反應(yīng)，可能與紅細(xì)胞膜有很多炎癥趨化因子受體有關(guān)。還可能涉及紅細(xì)胞膜膽固醇和紅細(xì)胞降解物，如血紅蛋白或血紅素，鐵和磷脂，尤其血紅素，是強(qiáng)的前氧化物，可觸發(fā)過氧化反應(yīng)，導(dǎo)致炎癥細(xì)胞浸潤，尤其當(dāng)膽固醇和氧化物同時(shí)大量聚集于斑塊時(shí)，產(chǎn)生氧化LDL-c，后者是促進(jìn)粥樣硬化進(jìn)展的一種關(guān)鍵物質(zhì)，可致巨噬細(xì)胞浸潤和炎癥因子表達(dá)進(jìn)一一步增高。炎性反應(yīng)導(dǎo)致了斑塊破裂和血栓形成：①巨噬細(xì)胞分泌的MMPs可以降解纖維帽中的膠原和細(xì)胞外基質(zhì)，T淋巴細(xì)胞分泌的INF-Y抑制血管平滑肌細(xì)胞表達(dá)膠原蛋白，使纖維帽變薄，易破裂：②細(xì)胞因子如TNF、IL-1等可以促進(jìn)巨噬細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞凋亡，使脂核變大，纖維帽變?。虎奂?xì)胞因子可以促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞和巨噬細(xì)胞分泌內(nèi)皮素，導(dǎo)致血管收縮，擠壓斑塊，促使其破裂：④斑塊內(nèi)巨噬細(xì)胞分泌組織因子，促進(jìn)血栓形成。E-ch在冠心病臨床過程中呈一過性或暫時(shí)性增高，與慢性病變迅速進(jìn)入ACS急性過程相一致，從以上論述說明E-ch可能通過炎癥和出血兩個(gè)機(jī)制促使斑塊快速進(jìn)展為易損斑塊。

篇6

【關(guān)鍵詞】 網(wǎng)織紅細(xì)胞參數(shù)；再生障礙性貧血；治療過程；變化；臨床意義

DOI：10.14163/ki.11-5547/r.2016.03.021

再生障礙性貧血（aplastic anemia， AA）是目前臨床上的一種較為常見的疾病， 同時(shí)發(fā)病過程中也會對患者造成極為嚴(yán)重的危害。因此一種及時(shí)有效的治療手段極為重要， 但在臨床對患者治療的過程中， 對患者治療效果進(jìn)行分析的參數(shù)極為重要[1]。隨著近年來熒光染色技術(shù)的發(fā)展以及全自動血細(xì)胞分析儀的使用， 在對患者的血細(xì)胞常規(guī)參數(shù)實(shí)施檢驗(yàn)的過程中， 也能夠?qū)颊叩木W(wǎng)織紅細(xì)胞參數(shù)進(jìn)行檢驗(yàn)[2]。本院使用網(wǎng)織紅細(xì)胞參數(shù)作為治療再生障礙性貧血患者過程中的指標(biāo)， 取得了較好的效果， 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取100例本院2014年1～12月收治的再生障礙性貧血患者為研究對象。使用1987年全國再障學(xué)術(shù)會議中制定出的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)對患者的骨髓、血液進(jìn)行檢查， 均能確診。其中經(jīng)過治療后有效的50例患者設(shè)為觀察組， 男30例， 女20例， 年齡4～67歲， 中位年齡36歲。將經(jīng)過治療后無效的50例患者設(shè)為對照組， 男29例， 女21例， 年齡3～65歲， 中位年齡37歲。兩組患者年齡及性別等一般資料比較， 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 研究方法 本次研究中使用的儀器為西斯美康XN-2000血球儀， 試劑為血液分析儀中自帶的試劑。在此過程中， 通過高、中、低3種不同濃度的全血質(zhì)控物對患者進(jìn)行相應(yīng)的檢驗(yàn)。在臨床實(shí)施檢驗(yàn)的過程中， 將兩組患者的靜脈血1～2 ml放置在EDTA-K2的抗凝管中進(jìn)行混合均勻， 并在室溫下存放。在4 h內(nèi)按照全自動血液分析儀中的相關(guān)操作規(guī)程對患者的靜脈血網(wǎng)織紅細(xì)胞參數(shù)進(jìn)行相應(yīng)的測定， 并每天對患者進(jìn)行質(zhì)控處理。在對患者治療的過程中， 將患者的自身血液抽出， 并在抽出后進(jìn)行干細(xì)胞的培養(yǎng)， 在對干細(xì)胞培養(yǎng)完成后， 擇期對患者實(shí)施干細(xì)胞輸入的治療。

1. 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。P

2 結(jié)果

觀察組患者治療后的網(wǎng)織紅細(xì)胞參數(shù)明顯高于對照組， 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

3 討論

再生障礙性貧血是一種在臨床上較為常見的貧血性疾病， 主要是以造血干細(xì)胞損傷以及外周全血細(xì)胞減少為特征的一種貧血類疾病[3]。在再生障礙性貧血的發(fā)病原因方面， 實(shí)際上并不明確， 患者在臨床治療的過程中， 病情往往較為嚴(yán)重， 同時(shí)治療效果往往不佳， 預(yù)后也較差， 患者極有可能出現(xiàn)較為嚴(yán)重的出血癥狀[4]。在臨床對再生障礙性貧血治療的過程中， 通過對患者實(shí)施藥物治療， 可以對患者起到一定的治療效果， 但在此過程中， 通過一種指標(biāo)觀察藥物治療過程中的治療效果， 對患者的正確治療以及指導(dǎo)在治療過程中的藥物使用有著重要的意義[5]。再生障礙性貧血是一種物理、化學(xué)、生物或不明因素作用使骨髓造血干細(xì)胞和骨髓微環(huán)境嚴(yán)重受損， 造成骨髓造血功能減低或衰竭的疾病， 以全血細(xì)胞減少為主要表現(xiàn)的一組綜合征。據(jù)國內(nèi)21省（市）自治區(qū)的調(diào)查， 年發(fā)病率為0.74/10萬人口， 明顯低于白血病的發(fā)病率；慢性再障發(fā)病率為0.60/10萬人口， 急性再障為0.14/10萬人口；各年齡組均可發(fā)病， 但以青壯年多見；男性發(fā)病率略高于女性。再生不良性貧血也叫再生障礙性貧血， 是指骨髓未能生產(chǎn)足夠或新的細(xì)胞來補(bǔ)充血液細(xì)胞的情況。

有研究顯示， 再生障礙性貧血在臨床上是一種由于骨髓造血障礙而引起的一種獲得性的疾病。本次研究結(jié)果顯示， 再生障礙性貧血患者在臨床治療前的參數(shù)和患者在經(jīng)過治療后的網(wǎng)織紅細(xì)胞參數(shù)之間會出現(xiàn)顯著性的差異。這說明在臨床對再生障礙性貧血患者進(jìn)行治療的過程中， 網(wǎng)織紅細(xì)胞參數(shù)的升高是患者的骨髓造血功能得到恢復(fù)的一種重要指標(biāo)。同時(shí)目前也有研究顯示， 患者在造血功能受到了刺激后， 幼稚RET會從患者的骨髓中釋放外周血， 在此過程中， 患者體內(nèi)的HFR以及中熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞百分比（MFR）會顯著的提升， 這說明對于再生障礙性貧血患者而言， 在臨床上的網(wǎng)織紅細(xì)胞參數(shù)是一種重要的衡量患者病情以及治療效果的參數(shù)[6]。注意藥物和其他化學(xué)物質(zhì)的影響， 尤其是對于治療無效的再生障礙性貧血患者而言， 在臨床實(shí)施治療的過程中， 患者在治療前后的網(wǎng)織紅細(xì)胞參數(shù)并無明顯的改變。這種結(jié)果進(jìn)一步的說明， 在臨床對再生障礙性貧血患者治療的過程中， 通過使用網(wǎng)織紅細(xì)胞參數(shù)的方式能夠在臨床對患者的治療效果進(jìn)行較為完善的顯示， 因此能夠更好的指導(dǎo)患者進(jìn)行治療， 對于患者而言也有著重要意義。

綜上所述， 在臨床對再生障礙性貧血患者進(jìn)行治療的過程中， 通過檢驗(yàn)患者的網(wǎng)織紅細(xì)胞參數(shù)能夠更好的表明患者的治療效果， 并指導(dǎo)患者的治療， 對于患者而言有著極為重要的意義， 在臨床上值得推廣應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)

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[3] 李麗.運(yùn)動性低血紅蛋白形成過程中遞增負(fù)荷跑臺運(yùn)動對大鼠紅細(xì)胞及網(wǎng)織紅細(xì)胞參數(shù)影響的研究.北京體育大學(xué)學(xué)報(bào)， 2007， 30（3）：356-359.

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篇7

1 育苗時(shí)間和苗齡

彩虹瓜之寶在河南地區(qū)春季采用大棚3膜1苫覆蓋栽培，育苗時(shí)間在1月中下旬，2月下旬或3月初定植；大棚單層膜覆蓋栽培育苗在2月上中旬，3月中下旬定植。春季育苗適宜苗齡在35 d左右，或幼苗具有2~3片真葉時(shí)定植。

2 壯苗培育

2.1 種子處理

播前種子用0.1%~0.2% 高錳酸鉀溶液浸泡30 min（分）消毒，用清水洗凈后放入55 ℃ 溫水中，快速攪拌至室溫后再浸6~8 h（小時(shí)）；也可用50% 多菌靈可濕性粉劑500倍液浸種1 h，清水洗凈后再用30 ℃ 溫水浸種6~8 h，置于28~30 ℃ 條件下催芽，70% 的種子露白后即可播種。

2.2 育苗方式

建議購買育苗基質(zhì)和50孔標(biāo)準(zhǔn)穴盤進(jìn)行無土育苗，也可直接向大的育苗場或信譽(yù)好的育苗公司預(yù)訂商品苗，降低早春因天氣反?；蛴绻芾聿簧圃斐傻娘L(fēng)險(xiǎn)。如果大棚重茬2年以上，最好采用嫁接苗，嫁接苗抗重茬能力強(qiáng)，病害輕。

2.3 播種及苗期管理

一般1―2月初播種，育苗期需35~40 d。先將基質(zhì)裝入穴盤，再用其他穴盤壓出1~1.5 cm深的穴，將已催芽的種子播于穴內(nèi)，每穴1粒。注意種子平放、芽尖朝下，再蓋1層基質(zhì)，稍鎮(zhèn)壓后，置于育苗床架上，適量澆水，蓋1層塑料薄膜保溫保濕。

播種至出苗期要求較高溫度，在溫室內(nèi)可加蓋小拱棚，白天溫度控制在25~32 ℃、夜間15~18 ℃，夜間或陰雪天加蓋草苫保暖。50%~70% 的苗子出土后，白天溫度保持 25~32 ℃、夜間15~18 ℃。苗子長出心葉后，白天溫度保持在20~30 ℃、夜間12~15 ℃ 為宜。無土育苗水分散失較快，應(yīng)根據(jù)天氣、基質(zhì)及幼苗長勢，見干見濕澆水，澆水應(yīng)均勻細(xì)致。定植前7 d開始低溫?zé)捗?，白天保?20~25 ℃、夜間10~15 ℃。定植前2 d噴施1次600倍代森錳鋅或多菌靈藥液和500倍液磷酸二氫鉀或健植寶，帶肥帶藥定植，以促進(jìn)緩苗并防病。

3 大棚準(zhǔn)備及定植

3.1 提早覆膜

一般情況下上一茬作物收獲后，大多數(shù)種植戶會拆除棚膜，利用冬季低溫殺死有害生物。但為了在定植前有效提高棚內(nèi)地溫，可在定植前15~20 d 覆蓋大棚膜。

3.2 施基肥

根據(jù)棚內(nèi)土壤肥力 667 m2施腐熟豬糞 4 000~6 000 kg或雞糞2 000~3 000 kg，氮、磷、鉀三元復(fù)合肥50 kg，硫酸鉀15~20 kg，過磷酸鈣40 kg，其中一半結(jié)合耕翻撒施，另一半在挖瓜溝后溝施。重茬地多施有機(jī)肥和磷鉀肥可減少枯萎病危害。

3.3 深翻土地

為了給定植后的西瓜創(chuàng)造良好的根系生長環(huán)境，在施基肥的同時(shí)應(yīng)盡量將土地深翻。對于前茬枯萎病嚴(yán)重的地塊，可結(jié)合深翻667 m2施重茬靈（有效成分蠟質(zhì)芽孢桿菌）400 g或瓜枯寧（有效成分為40% 五硝多菌靈），以減輕枯萎病的危害。

3.4 土壤消毒

為了減少重茬病害，可采用嫁接苗或進(jìn)行土壤消毒辦法，減輕土傳病害對西瓜生長發(fā)育的影響。土壤消毒可用75% 百菌清可濕性粉劑或70%甲基硫菌靈可濕性粉劑，配成1 ∶ 50的藥土在翻地時(shí)均勻施入龜背畦土壤中，667 m2用藥量 0.5~1 kg。

3.5 開溝、做畦

瓜溝最好南北走向，為便于管理，吊蔓栽培最好采用寬窄行方式種植，溝心距1.2~1.4 m，溝寬60~80 cm、深20~30 cm，龜背畦寬度50~60 cm。普通栽培可起壟單行種植，壟寬30~40 cm，行距1.8 m，畦寬50~60 cm，雙行種植可節(jié)約大棚內(nèi)的小棚膜。

3.6 覆膜

溝、畦最好采用全覆膜方式，以有效降低空氣濕度，從而減輕病害發(fā)生。有條件的最好采用膜下滴灌方式灌溉，以降低棚內(nèi)濕度。

3.7 定植

春季當(dāng)大棚內(nèi)夜間氣溫穩(wěn)定在15 ℃ 以上時(shí)，選晴天上午定植。定植時(shí)瓜苗具有2~3片真葉。為了有效利用空間，提高光照利用率，吊蔓種植采用三角形定植，株距50~60 cm，667 m2定植1 800~2 000株。普通栽培采用寬窄行定植，蔓爬向兩邊，寬行距1.8 m，窄行距40 cm左右，株距35~40 cm，667 m2定植1 000株左右。在瓜苗移栽和田間管理過程中要盡量避免踩踏畦面，以免影響根系周圍土壤疏松度和透氣性。定植后覆蓋地膜，再扣小拱棚，并覆蓋草苫，定植后澆1次緩苗水。注意定植嫁接苗時(shí)，嫁接口一定要留在地面以上，以防接穗發(fā)生不定根，失去防病效果。

4 定植后的田間管理

4.1 溫度管理

西瓜定植后應(yīng)根據(jù)天氣情況采取相應(yīng)措施滿足其不同生長發(fā)育時(shí)期對溫度的需求。定植后5~7 d盡量不放風(fēng)或少放風(fēng)，白天氣溫保持 28~32 ℃，夜間不低于15 ℃，土壤溫度保持12 ℃ 以上，以利于緩苗。緩苗后白天溫度應(yīng)控制在23~28 ℃，夜間 15~18 ℃。開花坐果期白天溫度 25~30 ℃，夜間 15~20 ℃。果實(shí)膨大期白天溫度 25~32 ℃，夜間 15~20 ℃。

4.2 濕度管理

根據(jù)品種特性，春季大棚內(nèi)空氣濕度白天控制在55%~60%，夜間75%~80%，最有利于西瓜生長發(fā)育。濕度過高加上夜間低溫，極易引發(fā)真菌性和細(xì)菌性病害，降低棚內(nèi)空氣濕度措施除地膜覆蓋外，還應(yīng)在前期控制灌水，中期加強(qiáng)通風(fēng)排濕，采用無滴膜等。

4.3 整枝、吊蔓

吊蔓種植采用單蔓整枝或 1蔓半整枝方式，待主蔓長30 cm左右時(shí)，撤掉小拱棚，并將主蔓吊起，坐瓜前去除主蔓上的側(cè)蔓及分杈，以減少養(yǎng)分消耗，選留主蔓第2朵雌花授粉留瓜，促進(jìn)坐瓜。選擇晴天下午整枝，以免折斷和損傷莖蔓及葉片，并有利于傷口愈合，減少病害感染。

普通種植采用雙蔓整枝，留1條主蔓和1條健壯側(cè)蔓。坐瓜前去除主蔓上的側(cè)蔓及分杈，以減少養(yǎng)分消耗，促進(jìn)坐瓜，選留第2朵雌花授粉留瓜，坐瓜后可不再打杈。

4.4 人工授粉、留瓜、吊瓜

主蔓第2朵雌花開放后授粉留瓜，雌花開放當(dāng)日待花粉散開后于10：00左右進(jìn)行人工授粉，授粉時(shí)溫度在18~22 ℃。授粉前先取下雄花，去掉花瓣在手上輕微涂抹，檢查花粉是否散開，如呈粉狀即可授粉；若呈粒狀，則先扒開風(fēng)口放小風(fēng)排濕約30 min，待花粉散開后再授粉。授粉時(shí)去掉雄花花瓣，用雄蕊側(cè)面輕輕涂抹雌花 3個(gè)柱頭，要均勻一致。授粉當(dāng)日溫度不得超過28 ℃，并做好授粉標(biāo)記，以利于判斷西瓜成熟度。如果花粉不足，也可用吡效隆處理，以提高坐果率，但應(yīng)嚴(yán)格根據(jù)產(chǎn)品說明書使用。另外，如瓜苗長勢不整齊，可對長勢較旺的瓜秧捏尖，促進(jìn)其開花坐果。具體方法是輕捏瓜秧近生長點(diǎn)處，聽見響聲即可。

吊蔓種植，當(dāng)幼果0.3~0.5 kg時(shí)開始吊瓜，可用網(wǎng)袋套住幼瓜，再將網(wǎng)袋吊起，或者用尼龍繩系住果柄吊在上方鐵絲或橫桿上。

4.5 肥水管理

水分管理應(yīng)根據(jù)西瓜不同發(fā)育階段需水情況和長勢強(qiáng)弱進(jìn)行?？偟脑瓌t是幼苗期要少，以利于根系下扎；伸蔓期和開花期要適當(dāng)，以保證植株正常生長和開花、授粉所需水分；果實(shí)膨大期水分要足，此期充足的水分供應(yīng)是保證果實(shí)充分膨大的關(guān)鍵因素之一；成熟期澆水要少，西瓜定個(gè)后，控制水分供應(yīng)，采收前7 d 停止?jié)菜似谶m當(dāng)控制水分，有利于提高西瓜含糖量和品質(zhì)。

應(yīng)根據(jù)基肥施入量和植株生長狀況合理追肥。一般在植株不同生長發(fā)育期適當(dāng)追肥，伸蔓期667 m2施磷酸二銨或氮、磷、鉀三元復(fù)合肥10~15 kg，追肥應(yīng)距瓜根10~15 cm，穴施或者結(jié)合澆水沖施。果實(shí)膨大期 667 m2可用高氮高鉀復(fù)合肥20~25 kg，結(jié)合澆水沖施。

4.6 病蟲害防治

篇8

【摘要】

目的: 研究系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）模型小鼠的脾臟細(xì)胞凋亡及其相關(guān)調(diào)控機(jī)制。方法: 采用ConA活化的同系脾臟細(xì)胞誘導(dǎo)BALB/c小鼠SLE， 通過檢測其外周血自身抗體、 腎組織病理學(xué)改變確定SLE小鼠模型誘導(dǎo)成功。脾臟細(xì)胞凋亡的檢測采用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法，免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測脾臟細(xì)胞Bcl2和NFκB的表達(dá)。結(jié)果: ConA活化的同系脾臟細(xì)胞成功誘導(dǎo)BALB/c小鼠發(fā)生SLE， 與鹽水對照組和未活化脾臟細(xì)胞組比較， SLE模型小鼠脾臟細(xì)胞凋亡率明顯降低， Bcl2和NFκB的表達(dá)均增加（P

【關(guān)鍵詞】 系統(tǒng)性紅斑狼瘡 細(xì)胞凋亡 Bcl 2 NF κB

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus， SLE）患者體內(nèi)產(chǎn)生多種自身抗體， 核小體是主要的抗原， 核小體通常存在細(xì)胞核內(nèi)， 體內(nèi)完整的核小體抗原是由細(xì)胞凋亡DNA斷裂產(chǎn)生的。研究表明， SLE患者存在細(xì)胞凋亡紊亂， 細(xì)胞凋亡過度[1]或凋亡過低[2]都可導(dǎo)致SLE的發(fā)生。機(jī)體免疫細(xì)胞的凋亡紊亂可能是細(xì)胞內(nèi)凋亡相關(guān)基因異常表達(dá)的結(jié)果， 如Bcl2和NFκB。因此， 本研究采用ConA活化的同系脾臟細(xì)胞免疫BALB/c小鼠誘導(dǎo)SLE的發(fā)生， 同時(shí)檢測其脾臟細(xì)胞凋亡及Bcl2和NFκB表達(dá)的改變以明確細(xì)胞凋亡紊亂是否是這一SLE模型小鼠發(fā)病的始動因素， 檢測凋亡調(diào)控因子的改變以揭示SLE發(fā)病機(jī)制， 為臨床治療SLE提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料 BALB/c近交系小鼠(雌性， 7～8周齡， 體質(zhì)量18～22 g， 清潔級)， 購自哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬二院實(shí)驗(yàn)動物中心。動物合格證號: SCXK（黑）20020002。刀豆蛋白A(ConA)為Sigma 公司產(chǎn)品。RPMI1640培養(yǎng)基為Gibco公司產(chǎn)品。FITC標(biāo)記的山羊抗小鼠 IgG 為Santa Cruz公司產(chǎn)品。抗核抗體（antinuclear antibody， ANA）和抗組蛋白抗體（antihistone antibody， AHA）（H2AH2B）ELISA試劑盒為美國BPB 生物醫(yī)學(xué)有限公司產(chǎn)品。末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記（terminal deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling， TUNEL）試劑盒購自美國Promega公司。兔抗Bcl2和小鼠抗NFκB一抗為Santa Cruz公司產(chǎn)品。兔二步法和小鼠二步法檢測試劑盒為北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 ConA活化的脾臟細(xì)胞的制備 無菌取脾臟制備脾臟細(xì)胞懸液， 用含100 mL/L胎牛血清的RPMI1640調(diào)整脾臟細(xì)胞密度為2×109/L， 加入ConA， 使其終濃度為0.005 g/L。然后置37℃、 50 mL/LCO2培養(yǎng)箱內(nèi)孵育3 d， 收集脾臟細(xì)胞懸液，

并用生理鹽水調(diào)整脾臟細(xì)胞密度為2×1011/L備用。同時(shí)制備未添加ConA的脾臟細(xì)胞作對照[3]。

1.2.2 動物分組及BALB/c小鼠SLE模型的誘導(dǎo) (1)SLE模型誘導(dǎo)組（MI組）: 取活化的脾臟細(xì)胞5×107/只（大約0.2～0.3 mL）分皮下幾點(diǎn)注射。每周1次， 連續(xù)3次， 第4 周開始進(jìn)行相應(yīng)檢測。(2)脾臟細(xì)胞對照組（CC組）: 給正常小鼠在相同時(shí)間、 相同部位注射同等劑量的未經(jīng)活化的同系脾臟細(xì)胞懸液。(3)生理鹽水對照（NC組）: 給正常小鼠在相同時(shí)間、 相同部位注射相同體積的生理鹽水[3]。

1.2.3 SLE模型鼠的鑒定 (1)樣本收集: 于實(shí)驗(yàn)第4周摘除眼球采血析出血清待測，留取腎臟標(biāo)本進(jìn)行病理學(xué)檢測。(2)SLE模型鼠外周血中ANA、 AHA水平的測定: 采用ELISA法檢測， 具體步驟按試劑盒說明進(jìn)行。(3)腎臟病理學(xué)檢測: 進(jìn)行光學(xué)顯微鏡、 熒光顯微鏡和電子顯微鏡檢查。①光學(xué)顯微鏡觀察: 常規(guī)石蠟切片， HE染色， 用中性樹脂封固， 光學(xué)顯微鏡下觀察腎臟炎性改變。②熒光顯微鏡觀察: 采用直接免疫熒光法， 簡述如下: 取出凍存于-70℃冰箱中的小鼠腎臟， OCT包埋， 5 μm切片， 滴加FITC標(biāo)記的羊抗小鼠IgG抗體（1∶100稀釋）于組織切片上， 置37℃孵育30 min， PBS液沖洗， 緩沖甘油封片， 在熒光顯微鏡下觀察腎小球內(nèi)有無IgG沉積及分布部位。③電子顯微鏡觀察: 腎臟經(jīng)30 g/L戊二醛前固定、 鋨酸后固定、 環(huán)氧樹脂812包埋、 超薄切片、 電子染色后， 透射電鏡觀察腎小球基底膜、 足突的變化及有無電子致密物沉積。

1.2.4 SLE模型鼠脾臟細(xì)胞凋亡的檢測 于實(shí)驗(yàn)第4、 6、 8、 10 周， 無菌取小鼠脾臟， 制備脾臟細(xì)胞懸液， 涂片。采用TUNEL試劑盒檢測脾臟細(xì)胞凋亡， 具體操作步驟按照試劑盒說明書進(jìn)行。熒光顯微鏡下觀察并拍照， 采用NISElements BR2.30圖像分析系統(tǒng)計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞百分率。

1.2.5 SLE模型鼠脾臟細(xì)胞Bcl2和NFκB的檢測 于實(shí)驗(yàn)第4、 6、 8、 10 周， 收集脾臟細(xì)胞， 涂片固定， 30 mL/L H2O2去除內(nèi)源性過氧化物酶， 分別滴加1∶200稀釋的一抗（兔抗小鼠Bcl2和小鼠抗小鼠NFκB） 50 μL， 4℃過夜， PBS洗滌， 再分別滴加相應(yīng)的酶標(biāo)二抗（抗兔和抗小鼠） 1滴， 30℃ 25 min， 洗滌后， DAB顯色5～10 min， 蘇木素復(fù)染， 脫水透明， 中性樹膠封片， 顯微鏡下觀察并拍照， 采用圖像分析系統(tǒng)計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞百分率。

1.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件， 單因素方差分析比較各組均值的差異明顯。P

2 結(jié)果

2.1 SLE模型鼠的成功建立

2.1.1 SLE模型鼠外周血中ANA和AHA水平的變化 MI組BALB/c小鼠自接種活化脾臟細(xì)胞后第4 周外周血中出現(xiàn)ANA和AHA， 并隨時(shí)間濃度逐漸增加， 到第8周達(dá)到最高峰， 第10 周有所降低(圖1)。

圖1 SLE模型鼠外周血中ANA、 AHA水平的變化（略）

2.1.2 SLE模型鼠腎臟病理的改變 光學(xué)顯微鏡觀察MI組小鼠第4周即出現(xiàn)腎小球腎炎， 表現(xiàn)為腎小球體積增大， 系膜細(xì)胞增生，腎間質(zhì)有炎細(xì)胞浸潤。而CC組和NC組小鼠腎小球結(jié)構(gòu)清晰， 無異常病理改變（圖2）。熒光顯微鏡檢查發(fā)現(xiàn)MI組小鼠腎臟冰凍切片中大多數(shù)腎小球內(nèi)都有綠色的斑塊狀沉積物， 可見腎小球毛細(xì)血管襻免疫復(fù)合物沉積， 呈連續(xù)性熒光分布（圖3）。而CC組和NC組小鼠腎臟未見IgG類免疫復(fù)合物的沉積，直接熒光染色微弱、 無特異性，腎小球輪廓不清（圖3）。透射電鏡下可見MI組小鼠基底膜區(qū)有電子致密物沉積。 CC組和NC組基底膜厚度均勻， 濾過屏障結(jié)構(gòu)完好， 未見電子致密物沉積（圖4）。

圖2 SLE模型鼠腎臟病理形態(tài)改變 (HE， ×400)（略）

A: NC; B: CC; C: MI.

圖3 SLE模型小鼠IgG類IC沉積的變化(免疫熒光法， ×400)（略）

A: CC; B: NC; C: MI.

圖4 SLE模型鼠腎臟超微結(jié)構(gòu)的改變（略）

A: NC(腎小球足細(xì)胞結(jié)構(gòu)完好， 濾過屏障清晰， ×18000); B: CC(基底膜厚度均勻， 濾過屏障結(jié)構(gòu)完好， ×12000); C: MI(免疫復(fù)合物沉積在基膜， ×15000).

2.2 SLE模型鼠的脾臟細(xì)胞凋亡的變化 采用TUNEL試劑盒檢測發(fā)現(xiàn)正常細(xì)胞呈均勻熒光染色， 而凋亡細(xì)胞呈致密濃染的顆粒狀或塊狀熒光（圖5）。與NC組和CC組（第4、 6、 8和10周分別為1.46±0.24、 1.37±0.34、 1.40±0.23、 1.28±0.19和1.39±0.23、 1.43±0.18、 1.38±0.32、 1.35±0.26）相比較， MI組（第4、 6、 8和10周分別為0.89±0.16、 0.79±0.32、 0.94±0.19、 1.02±0.27）小鼠脾臟細(xì)胞凋亡百分率明顯降低（P

圖5 SLE模型鼠脾臟細(xì)胞凋亡的變化（TUNEL， ×400）（略）

A: NC; B: CC; C: MI.

2.3 SLE模型鼠脾臟細(xì)胞Bcl2的表達(dá) 免疫細(xì)胞化學(xué)檢測發(fā)現(xiàn)Bcl2陽性染色為細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒， 與NC組和CC組（第4、 6、 8、 10周分別為46.92±10.31、 47.87±6.34、 44.32±9.23、 40.94±5.76和41.67±8.43、 45.78±5.64、 40.82±5.86、 44.36±4.87）相比較， MI組小鼠脾臟細(xì)胞Bcl2表達(dá)細(xì)胞的百分率(第4、 6、 8、 10 周分別為89.78±7.62、 92.45±2.89、 80.67±4.87、 75.63±7.83)明顯增加（P

2.4 SLE模型鼠脾臟細(xì)胞NFκB的表達(dá) 免疫細(xì)胞化學(xué)檢測發(fā)現(xiàn)NFκB P65陽性染色為細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中均出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒， 與NC組和CC組（第4、 6、 8、 10周分別為31.92±7.53、 28.45±7.42、 34.54±6.43、 31.34±6.85和33.54±6.75、 34.47±5.86、 33.25±7.32、 29.65±4.68）相比較， MI組小鼠脾臟細(xì)胞NFκB表達(dá)細(xì)胞的百分率（第4、 6、 8、 10周分別為52.12±8.87、 59.32±4.76、 50.54±6.78、 47.25±2.87）明顯增加（P

3 討論

SLE的主要特點(diǎn)是外周血中出現(xiàn)多種自身抗體以及病變累及腎臟[4]。因此本研究通過檢測外周血中自身抗體以及腎臟病理學(xué)改變以確定SLE小鼠模型的成功誘導(dǎo)。結(jié)果顯示， MI組小鼠第4周外周血中出現(xiàn)ANA和AHA， 腎臟出現(xiàn)炎性改變， 腎小球毛細(xì)血管襻免疫復(fù)合物沉積， 腎臟超微結(jié)構(gòu)改變， 證明MI組小鼠發(fā)生了SLE。而兩對照組動物外周血中未檢出自身抗體， 腎臟也未出現(xiàn)病理改變。

越來越多的證據(jù)表明， SLE患者淋巴細(xì)胞及其亞群的凋亡異常與SLE的發(fā)生、 發(fā)展密切相關(guān)。絕大多數(shù)的研究表明SLE患者多種血細(xì)胞[5]存在凋亡加速的現(xiàn)象。體內(nèi)細(xì)胞凋亡加速導(dǎo)致核小體釋放增加， 致敏自身反應(yīng)性T細(xì)胞并活化B細(xì)胞，觸發(fā)SLE的發(fā)生。但凋亡障礙也會導(dǎo)致SLE的發(fā)生， 這在SLE動物模型中已經(jīng)得到證實(shí)， 如MRL/lpr[6]和MRL/gld[7]小鼠分別存在Fas、 FasL的單基因突變， 通過這一機(jī)制大幅度降低凋亡信號， 從而使自身反應(yīng)性淋巴細(xì)胞逃脫凋亡的命運(yùn)， 最終導(dǎo)致SLE的發(fā)生。在人類也發(fā)現(xiàn)1例FasL蛋白減少28個(gè)氨基酸， 導(dǎo)致淋巴組織明顯增生， 臨床上有SLE表現(xiàn)[8]。因此任何形式的凋亡紊亂（凋亡的增加或降低）都可能導(dǎo)致SLE的發(fā)生。

Bcl2和NFκB是兩個(gè)重要的凋亡調(diào)控因子。Bcl2基因是人們在研究B細(xì)胞淋巴瘤中發(fā)現(xiàn)的一種異常表達(dá)的原癌基因， 其高表達(dá)能阻抑多種凋亡誘導(dǎo)因素所引發(fā)的細(xì)胞凋亡。NFκB是近年發(fā)現(xiàn)的轉(zhuǎn)錄因子家族中的新成員， 是細(xì)胞內(nèi)最重要的核轉(zhuǎn)錄因子， 是細(xì)胞激活的標(biāo)志， 控制眾多包括免疫炎癥反應(yīng)、 細(xì)胞周期進(jìn)展、 凋亡抑制和細(xì)胞黏附等基因。近年的研究表明NFκB與細(xì)胞凋亡的關(guān)系密切， 參與多種凋亡相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控。有研究表明NFκB的激活是SLE發(fā)生所必須的[9]， 而且發(fā)現(xiàn)NFκB抑制物明顯減輕MRL/Fas(lpr)小鼠的皮膚病。bcl2啟動子上存在NFκB的特異性結(jié)合位點(diǎn)， NFκB可通過轉(zhuǎn)錄途徑直接上調(diào)bcl2表達(dá)[10]。另外， Bcl2是NFκB所控靶基因表達(dá)的激活劑， 它的作用就是能與P50/P56同源二聚體結(jié)合， 從而將其從κB結(jié)合位點(diǎn)移開， 讓異源二聚體有機(jī)會結(jié)合啟動子位點(diǎn)并發(fā)揮活性。因此， NFκB作為一種抑制凋亡的轉(zhuǎn)錄因子， 通過對Bcl2一類下游抗凋亡基因的調(diào)控， 對免疫細(xì)胞的正常程序化死亡產(chǎn)生抑制作用， 從而間接促進(jìn)SLE的發(fā)生和發(fā)展。

總之， 我們在研究中發(fā)現(xiàn)免疫同系活化脾臟細(xì)胞的小鼠的自身脾臟細(xì)胞自發(fā)凋亡率明顯降低， 這可能是由于體內(nèi)異常核小體大量增加致敏自身反應(yīng)性淋巴細(xì)胞， 通過NFκB調(diào)節(jié)凋亡抑制基因Bcl2表達(dá)， 抑制淋巴細(xì)胞的凋亡。淋巴細(xì)胞凋亡過低可能是ConA活化的同系脾臟細(xì)胞誘導(dǎo)BALB/c小鼠發(fā)生SLE的原因之一。

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篇9

關(guān)鍵詞水情監(jiān)測；洪水預(yù)警預(yù)報(bào)系統(tǒng)；遼寧省

中圖分類號TV697.2文獻(xiàn)標(biāo)識碼A文章編號 1007-5739（2013）12-0331-02

StudyonFloodHydrologicalMonitoringandFloodWarningSystemTechnologyinLiaoningProvince

FENG Lin

（Hydrology and Water Resources Survey Bureau of Liaoning Province，Shenyang Liaoning 110003）

AbstractFlood hydrological monitoring and flood warning system technology of Liaoning Province is a practical and innovative scientific research achievement，which is researched by Hydrology and Water Resources Survey Bureau of Liaoning after 10 years.The paper summarized and introduced its gains and running practices for years.

Key wordsflood hydrological monitoring；flood warning system technology；Liaoning Province

1項(xiàng)目背景及意義

遼寧省水旱災(zāi)害頻發(fā)。1949―2010年期間，于1951、1953、1960、1962、1985、1995、2005、2010年發(fā)生洪水災(zāi)害，給國民經(jīng)濟(jì)和人民生命財(cái)產(chǎn)造成了重大損失。統(tǒng)計(jì)“1995.7”大洪水可知：全省受災(zāi)縣（市、區(qū)）達(dá)44個(gè)，人口584萬人，直接經(jīng)濟(jì)損失347億元，占同期GDP（2 797億元）的12.4%。因此，洪水災(zāi)害是影響全省經(jīng)濟(jì)和社會可持續(xù)發(fā)展的主要自然災(zāi)害之一，防洪減災(zāi)是水利部門的重要職責(zé)。在加強(qiáng)防洪工程體系建設(shè)的同時(shí)，還應(yīng)大力加強(qiáng)防汛水情監(jiān)測及洪水預(yù)警預(yù)報(bào)系統(tǒng)等非工程措施建設(shè)。在系統(tǒng)開展該項(xiàng)目研究前存在的突出問題有以下幾點(diǎn)：①水文監(jiān)測手段相對落后。水位以人工觀測水尺、流量以測船、降水以雨量計(jì)等人工監(jiān)測為主。②水情測報(bào)站點(diǎn)嚴(yán)重不足。雨量等自動報(bào)汛站有342處，不足現(xiàn)在的1/4。③水情信息遲滯嚴(yán)重。受水情信息編、轉(zhuǎn)、譯報(bào)等環(huán)節(jié)傳輸技術(shù)影響，僅有1/3報(bào)汛站能在規(guī)定時(shí)限內(nèi)（30 min）將水情信息上報(bào)至省水文局。④水文分析、展示、會商等手段單一。可靠性、實(shí)時(shí)性、信息量等都難以保證。⑤水文預(yù)報(bào)方法模型單一，參數(shù)遴選等受GIS等技術(shù)限制，匹配難度大，預(yù)報(bào)精度低，尤其74座中型水庫和285座小型水庫信息空白、預(yù)報(bào)方案空白，一旦遇有險(xiǎn)情，后果嚴(yán)重[1]。

2主要研究內(nèi)容與技術(shù)路線

2.1研究內(nèi)容

針對遼寧省的防汛形勢和決策支持要求，項(xiàng)目主要開展以下研究：一是加強(qiáng)水文監(jiān)測、通訊傳輸、數(shù)據(jù)處理、決策支持系統(tǒng)建設(shè)，增加現(xiàn)代科技含量，提高自動化水平。二是實(shí)施遼寧省現(xiàn)代實(shí)用洪水預(yù)報(bào)系統(tǒng)建設(shè)，將現(xiàn)代洪水預(yù)報(bào)理論、專家經(jīng)驗(yàn)和智慧、人類活動影響的實(shí)際情況有機(jī)地結(jié)合，實(shí)現(xiàn)數(shù)字化洪水預(yù)報(bào)，提高洪水預(yù)報(bào)精度，增長洪水預(yù)見期。三是優(yōu)化水庫、河道聯(lián)合洪水調(diào)度系統(tǒng)，發(fā)揮工程防洪最大效能。

2.2技術(shù)路線

該研究充分立足于現(xiàn)有防洪工程體系，著力加強(qiáng)非工程措施建設(shè)，在防汛水情數(shù)據(jù)采集方面，通過新技術(shù)和新儀器的試驗(yàn)和應(yīng)用，改變原有人工觀測的模式，實(shí)現(xiàn)全省2 000余站點(diǎn)水情信息的自動采集和傳輸，以提高水情信息采集的數(shù)量、質(zhì)量和傳輸速度；在水情信息接收、分析處理和信息方面，通過研發(fā)信息交換技術(shù)等新技術(shù)手段，實(shí)現(xiàn)國家部委、省氣象、國土等數(shù)據(jù)信息的直接全面共享，以擴(kuò)大遼寧省防汛信息資源量；通過新技術(shù)開發(fā)和應(yīng)用以最快捷、最全面、最清晰的方式在不同的平臺上給各級防汛工作者和決策者予以查詢和顯示，以便隨時(shí)掌握防汛水情信息；通過研究和應(yīng)用最優(yōu)化、最適合遼寧下墊面情況洪水預(yù)報(bào)模型和洪水預(yù)報(bào)方法，提高洪水預(yù)報(bào)精度，延長預(yù)見期，為防汛決策和搶險(xiǎn)贏得寶貴時(shí)間[2]。

2.3開展的主要工作

該項(xiàng)目由遼寧省水文局、遼寧省防辦于2003年開始相關(guān)研究和建設(shè)工作。2003年研究并編制遼河流域?qū)嵱煤樗A(yù)報(bào)方案；2004年編制遼寧省西部、東南部實(shí)用洪水預(yù)報(bào)方案；2005年開始開發(fā)遼寧省實(shí)用洪水預(yù)報(bào)系統(tǒng)，全省雨量、水位、流量觀測等大量引進(jìn)和應(yīng)用新技術(shù)和新儀器；2006年引進(jìn)中國洪水預(yù)報(bào)系統(tǒng)，開發(fā)遼寧省防汛抗旱水情信息網(wǎng)，進(jìn)行水情自動測報(bào)系統(tǒng)的建設(shè)工作；2007年開發(fā)遼寧省防汛抗旱水情值班系統(tǒng)；2009年進(jìn)行中小水庫洪水預(yù)警預(yù)報(bào)系統(tǒng)的建設(shè)合水庫洪水預(yù)報(bào)方案研制工作。2010年研發(fā)水情數(shù)據(jù)交換系統(tǒng)、水情易信通顯示系統(tǒng)等，同時(shí)實(shí)現(xiàn)水情信息全面共享。其系統(tǒng)技術(shù)路線見圖1。

3主要研究成果

該項(xiàng)目結(jié)合遼寧省水文防汛工作實(shí)際需求在水情信息監(jiān)測、傳輸、分析、、洪水預(yù)報(bào)預(yù)警等方面取得了多項(xiàng)研究成果。

（1）在水情信息采集、洪水分析模擬計(jì)算、水文預(yù)報(bào)等功能模塊的關(guān)鍵技術(shù)環(huán)節(jié)中，應(yīng)用GPS、GIS、ADCP、超聲波、固態(tài)存儲、遙測、雷達(dá)先進(jìn)技術(shù)；應(yīng)用新安江模型、MIKE-11、NASH單位線、三維模擬、遼寧模型等先進(jìn)實(shí)用模型，構(gòu)建了適合遼寧省實(shí)際情況的水文情報(bào)預(yù)報(bào)系統(tǒng)集成，保證了用于防汛決策支持的準(zhǔn)確性和科學(xué)性。

（2）在各類水情信息傳輸過程中，最新采用水情信息交換技術(shù)，擺脫了原有各個(gè)環(huán)節(jié)需編碼、解碼等大量繁冗數(shù)據(jù)處理工作，充分實(shí)現(xiàn)了水情分中心、省水情中心、松遼委、國家水情信息中心的水情信息全面、直接、開放式共享，水情信息的時(shí)效性由原來的1 h縮短到5 min，解決了信息傳輸方面的關(guān)鍵技術(shù)問題。系統(tǒng)特點(diǎn)：低成本、易安裝、易維護(hù)；業(yè)務(wù)覆蓋全面：集數(shù)據(jù)輪詢、發(fā)送、接收、入庫、實(shí)時(shí)監(jiān)控、提示預(yù)警等功能于一身，同時(shí)能夠應(yīng)對網(wǎng)絡(luò)故障、大數(shù)據(jù)量傳輸?shù)忍厥馇闆r；畫面較直觀，操作較簡單；運(yùn)行穩(wěn)定且可靠[3]。

篇10

[關(guān)鍵詞] 丹紅注射液；缺血再灌；心肌細(xì)胞；細(xì)胞凋亡

[中圖分類號] R331.3 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-7210（2012）02（a）-0024-02

The effect of Danhong Injection pretreatment on cardiomyocytes cell of ischemic-reperfusion rats

ZHENG Yaping HAN Kun

Department of Physiology, Luohe Medical College, He′nan Province, Luohe 462002, China

[Abstract] Objective To investigate the effect of Danhong Injection pretreatment on cardiomyocytes cell of ischemic-reperfusion rats. Methods The rats cardiomyocytes were cultured and pretreated with Danhong Injection in four different concentrations: 2％, 4％, 8％, 16％ before create cardiomyocytes I/R model after 24 hours for pretreatment. The apoptotic rate of cardiomyocytes was determined by flow cytometry, the protein expressions of Bcl-2 and Bax were observed by imnmnohistochemistry. Results Compared with control group, the apoptotic rates were significantly increased in ischemia-reperfusion (I/R) group, and the protein expressions of Bax expressions was significantly up-regulated and Bcl-2 expressions was down-regulated. Pretreatment of cardiomyocytes with Danhong Injection increased the expression of Bcl-2, decreased the expression of Bax and the apoptotic rate in a dose-dependent fashion. Conclusion Danhong Injection alleviates I/R injury in a concentration-dependent manner. These effects may be partially that Danhong Injection can inhibit Bas gene protein expression and induce Bcl-2 gene protein expression.

[Key words] Danhong Injection; Ischemia-reperfusion; Cardiomyocytes; Apoptosis

心肌缺血再灌注損傷（isehemia-reperfusioninjury，I/R）是心臟缺血性疾病及心外術(shù)后心肌損害的主要原因，其導(dǎo)致的心肌細(xì)胞凋亡被認(rèn)為是再灌注損傷的重要環(huán)節(jié)。丹紅注射液是由丹參與紅花萃取制備而成，具有保護(hù)心血管的作用，已有動物實(shí)驗(yàn)提示丹紅注射液對大鼠離體心臟缺血再灌有保護(hù)作用[1]，但其對缺血再灌心肌細(xì)胞的直接作用的報(bào)道較少。本研究采用心肌細(xì)胞缺血再灌注細(xì)胞模型，觀察丹紅注射液預(yù)處理對其的影響，初步研究其作用的可能機(jī)制。

1 儀器與試藥

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

出生2～3 d的SD大鼠。

1.2 試劑

丹紅注射液（濟(jì)南步長制藥有限公司，批號：Z20026866），胰蛋白酶、DMEM培養(yǎng)基（均為Sigma公司）；胎牛血清（杭州四季青公司），鼠抗橫紋肌肌動蛋白單克隆抗體、抗Bcl-2、抗Bas（均為博士德公司），其余試劑均為市售分析純。

1.3 心肌細(xì)胞培養(yǎng)、鑒定

取2～3 d的SD大鼠，在無菌條件下取出心室，剪碎，0.1%胰酶消化，收集細(xì)胞，離心，重懸，置于二氧化碳培養(yǎng)箱中孵育。根據(jù)心肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞貼壁時(shí)間不同，采用差速貼壁1.5 h，獲得心肌細(xì)胞。免疫組化染色觀察α-橫紋肌肌動蛋白反應(yīng)。

1.4 缺血再灌注體外模型的建立

將培養(yǎng)的心肌細(xì)胞更換無血清培養(yǎng)基，缺氧培養(yǎng)箱（95%N2、5%CO2）中培養(yǎng)3 h后，置10%胎牛血清DMEM培養(yǎng)基，常規(guī)培養(yǎng)9 h。

1.5 實(shí)驗(yàn)分組

將心肌細(xì)胞按照2×105/mL均勻的接種于24孔板中，丹紅組分別以2%、4%、8%、16%的給藥濃度[1]，實(shí)驗(yàn)共分6組，每組5個(gè)孔，即：①正常對照組（用無胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)液）；②缺血再灌注（I/R）組；③I/R+丹紅注射液（2%）組；④I/R+丹紅注射液（4%）組；⑤I/R+丹紅注射液（8%）組；⑥I/R+丹紅注射液（16%）組。

1.6 流式細(xì)胞儀檢測凋亡率

0.25%胰蛋白酶消化各組心肌細(xì)胞，用4℃預(yù)冷的PBS洗滌2次，離心5 min，重懸細(xì)胞，于70%冷乙醇（4℃）過夜。檢測時(shí)離心10 min（1 000 r/min），PBS洗去乙醇。細(xì)胞沉淀用碘化丙啶（PI）4℃避光染色30 min，上機(jī)檢測。G期前的亞二倍體峰即代表凋亡峰，反映凋亡細(xì)胞的百分比。

1.7 Bas、Bcl-2基因蛋白表達(dá)

各組心肌細(xì)胞爬片，固定，在室溫下用3% H2O2處理30 min以滅活過氧化物酶，后加入Bcl-2、Bax抗體4℃過夜，加入沖洗后依次加入1∶100生物素化山羊抗兔IgG和1∶100抗生物素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物液，DAB染色，復(fù)染，脫水，透明后封片。細(xì)胞漿顯示棕黃色顆粒細(xì)胞為陽性細(xì)胞，將玻片于光學(xué)顯微鏡下放大200倍，根據(jù)陽性細(xì)胞分布情況，每片選擇10個(gè)視野，每視野計(jì)算Bcl-2、Bax蛋白陽性表達(dá)的細(xì)胞數(shù)，以平均計(jì)算陽性細(xì)胞數(shù)所占百分比作為Bcl-2、Bax蛋白蛋白陽性表達(dá)指數(shù)。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 11.5軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組比較采用方差分析，組間兩兩比較采用SNK檢驗(yàn)。以P < 0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 光鏡下心肌細(xì)胞鑒定結(jié)果

心肌細(xì)胞鑒定光鏡下觀察，心肌細(xì)胞接種72 h可見細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，呈梭形，三角形或多邊形，單核，有多個(gè)偽足伸出，形成細(xì)胞簇；免疫組化染色顯示，α-橫紋肌肌動蛋白呈陽性反應(yīng)，陽性率達(dá)90％以上。

2.2 流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果

結(jié)果顯示，缺血再灌組細(xì)胞凋亡率表達(dá)明顯高于對照組，差異均有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）；與I/R組比較，用丹紅注射液預(yù)處理后呈濃度依賴性地下調(diào)凋亡率（P < 0.05或P < 0.01）。見表1。

表1 丹紅注射液對心肌細(xì)胞凋亡率的影響（x±s，％）

注：與正常對照組比較，*P < 0.05，**P < 0.01；與I/R組比較，#P < 0.05，##P < 0.01

2.3 Bas、Bcl-2蛋白的表達(dá)

結(jié)果顯示，缺血再灌組細(xì)胞Bas表達(dá)明顯高于對照組，Bcl-2表達(dá)則顯著低于對照組，差異均有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P < 0.01）；而與I/R組相比，用丹紅注射液預(yù)處理后呈濃度依賴性的下調(diào)凋亡率及Bas表達(dá)，上調(diào)Bcl-2表達(dá)（P < 0.05或P < 0.01）。見表2。

3 討論

缺血心肌的早期再灌注治療能減輕缺血損傷，使細(xì)胞凋亡下降，減小梗死面積，缺血較長時(shí)間后再灌注反而會引起再灌注損傷，造成細(xì)胞凋亡明顯增加，因而心肌細(xì)胞凋亡被認(rèn)為是再灌注損傷的重要環(huán)節(jié)[2]。丹紅注射液目前已用于臨床治療冠心病，且對離體大鼠缺血再灌注損傷的心肌具有保護(hù)作用，此作用可能與抑制心肌脂質(zhì)過氧化、增強(qiáng)抗氧化能力及調(diào)控凋亡基因有關(guān)[3]。

Bcl-2、Bas基因家族是目前較為公認(rèn)與凋亡密切相關(guān)的基因，Bcl-2基因可抑制許多因素引起的細(xì)胞凋亡，被稱為細(xì)胞凋亡抑制基因，Bas單克隆抗體在體內(nèi)與Bas結(jié)合后均能導(dǎo)致表達(dá)Bas的細(xì)胞發(fā)生凋亡，從而證明Bas是一種識別Bas配體，并將凋亡信息傳遞給細(xì)胞的細(xì)胞表面受體[4-5]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，心肌缺血再灌能促進(jìn)心肌細(xì)胞凋亡，且伴隨著Bcl-2基因表達(dá)蛋白的明顯降低和Bas基因表達(dá)蛋白的明顯升高；而丹紅注射液則能呈濃度依賴性地下調(diào)心肌細(xì)胞的凋亡率，并伴有Bcl-2基因表達(dá)蛋白的上調(diào)和Bas基因表達(dá)蛋白的下調(diào)。

大鼠心肌缺血再灌注過程中， Bcl-2蛋白表達(dá)減少而Bas蛋白表達(dá)增加，表明心肌細(xì)胞凋亡可能是一方面Bcl-2蛋白表達(dá)降低，抗凋亡能力減弱，而另一方面Bas蛋白表達(dá)增加，發(fā)揮了促凋亡能力的緣故[6]。丹紅注射液則可通過上調(diào)Bcl-2蛋白表達(dá)的和下調(diào)Bas蛋白表達(dá)，發(fā)揮保護(hù)缺血再灌心肌細(xì)胞的作用，這也為臨床上應(yīng)用丹紅治療心肌缺血再灌注損傷提供分子調(diào)控依據(jù)。

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